Tekst źródłowy strony Chromatografia elektroforeza

==Zadanie 1==
Chromatogram 1 uzyskano metodą chromatografii HPLC (highperformance liquid chromatography) dla próbki będącej mieszaniną dwóch cukrów A i B. Chromatogram 2 uzyskano dla tej samej mieszaniny, ale zastosowano inne warunki HPLC. 

[[Plik:chromatogram.png]]

Rozważ następujące zmiany warunków, w których uzyskano chromatogram 2:
<ol type="a">
<li> zmniejszenie ciśnienia fazy mobilnej,
<li> zmniejszenie temperatury,
<li> zastosowanie kolumny o mniejszym stopniu upakowania,
</ol>
Która z powyższych zmian odpowiada za różnice widoczne między chromatogramami 1 i 2? Odpowiedź uzasadnij.

==Zadanie 2==
Karbamoilotransferaza asparaginianowa (ATC-aza) to enzym biorący udział w syntezie zasad azotowych z grupy pirymidyn. Posiada niezwykłą budowę podjednostkową, która można określić stosując filtrację żelową (chromatografia typu sita molekularnego) i elektroforezę denaturującą (SDS-PAGE; SDS polyacrylamide gel electrophoresis). Hipotetyczne wyniki zostały zebrane poniżej.

Tabela <xr id="fig:tab_1"/> zawiera listę białek użytych do kalibracji kolumny chromatograficznej, ich masy cząsteczkowe oraz objętości, przy których zostały wymyte z kolumny. 
<ol type="a">
<li>Objętość elucji karbamoilotransferazy asparaginianowej na tej kolumnie wynosi 101 ml. Ile wynosi jej masa cząsteczkowa?
<figure id="fig:tab_1">
{|class="wikitable"
!Białko					
!Masa cząsteczkowa M [g]		
!Objętość elucji V [ml]
|-
|Cytochrom c					
|12 400					
|208
|-
|Mioglobina					
|17 800					
|194
|-
|Chymotrypsynogen				
|25 000					
|185
|-
|BSA						
|66 200					
|152
|-
|'''Dehydrogenaza mleczanowa'''
|'''295 000'''
|'''102'''
|-
|'''Apoferrytyna	'''
|'''475 000'''				
|'''90'''
|}
</figure>
<li> Enzym został poddany działaniu czynnika redukującego mostki disiarczkowe i ponownie przepuszczony przez kolumnę. Tym razem pojawiły się dwa piki, przy objętości 138 i 174 ml. Jakim masom odpowiadają?
<li> Następnie przeprowadzono elektroforezę denaturującą enzymu na żelu poliakrylamidowym. Białka przedstawione w tabeli <xr id="fig:tab_2"/>  zostały użyte do kalibracji żelu. Na żelu zaobserwowano dwa prążki pochodzące od karbamoilotransferazy w odległości 58 i 82 mm od początku żelu separującego. Jakie masy im odpowiadają?
<figure id="fig:tab_2">
{|class="wikitable"
!Białko					
!Masa cząsteczkowa  M [g]		
!Odległość d  [mm]
|-
|Lizozym					
|14 400					
|88
|-
|&beta;-laktoglobulina				
|18 400					
|78,2
|-
|Anhydraza węglanowa			
|29 000					
|70,0
|-
|Dehydrogenaza mleczanowa			
|35 000					
|55,2
|-
|'''Ovalbumina'''					
|'''45 000	'''				
|'''46,0'''
|-
|'''BSA	'''					
|'''66 200'''					
|'''30,2'''
|-
|'''&beta;-galaktozydaza	'''			
|'''116 000	'''			
|'''10,0'''
|}
</figure>
<li> Jakie wnioski dotyczące budowy czwartorzędowej karbamoilotransferazy aspartanowej możesz wysnuć na podstawie wyników uzyskanych w pktach a.-c.?
</ol>
==Zadanie 3==
Punkt izoelektryczny pewnego białka jest równy wartości pH , w którym przeprowadzana jest elektroforeza natywna. Do której elektrody (do katody czy anody) będzie migrowało to białko?
==Zadanie 4==
Jak zwiększenie stężenia akrylamidu wpływa na rozmiary porów żelu i rozdział makrocząsteczek pod względem wielkości? 
==Zadanie 5==
Jakiego typu nośnika używa się w przypadku elektroforezy makrocząsteczek o masach większych niż <math>\unit{100\times10^3}{ kDa}</math> (np. dwuniciowego DNA), które są zbyt duże by penetrować pory żelu poliakrylamidowego?
==Zadanie 6==
Który z poniższych czynników: pH, siła jonowa, temperatura czy natężenie prądu, mają największy wpływ na rozdział białek w przypadku elektroforezy natywnej? Odpowiedź uzasadnij.

[[category:Ćwiczenia z Metod Biofizyki Molekularnej]]
[[category:Biofizyka]]